高效液相色譜的功能特點
液相色譜是一類分離與分析技術,其特點是以液體作為流動相,固定相可以有多種形式,如紙、薄板和填充床等。在色譜技術發展的過程中.為了區分各種方法,根據固定相的形式產生了各自的命名,如紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。
經典液相色譜的流動相是依靠重力緩慢地流過色譜柱,因此固定相的粒度不可能太小(100μm~150μm左右)。分離后的樣品是被分級收集后再進行分析的,使得經典液相色譜不僅分離效率低、分析速度慢,而且操作也比較復雜。直到20世紀60年代.發展出粒度小于10μm的高效固定相,并使用了高壓輸液泵和自動記錄的檢測器,克服了經典液相色譜的缺點,發展成高效液相色譜,也稱為高壓液相色譜。
高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography,HPLC),是在經典液相色譜法的基礎上,于20世紀60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。與經典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻。因為較小的填充顆粒具有高柱效,但會引起高阻力,需用高壓輸送流動相,故又稱高壓液相色譜。
使用高效液相色譜時,液體待檢測物被注入色譜柱,通過壓力在固定相中移動,由于被測物種不同物質與固定相的相互作用不同,不同的物質順序離開色譜柱,通過檢測器得到不同的峰信號,后通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質。高效液相色譜作為一種重要的分析方法,廣泛地應用于化學和生化分析中。高效液相色譜從原理上與經典的液相色譜沒有本質的差別,它的特點是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相,適于分析高沸點不易揮發、分子量大、不同極性的有機化合物。